一、前言

非洲豬瘟（ASF）病由非洲豬瘟病毒（ASFV）引起，ASFV感染家豬、疣豬和南非野豬。該病通過健康和患病動物之間的直接接觸，或通過受感染的飼料間接接觸，以及通過生物載體（軟蜱）進行傳播。有特急性、急性、亞急性和慢性的發病形式，其中，急性疾病潛伏期短，大約3-7天，伴隨高燒（可達42°C），并在5-10天內死亡。由于豬感染的病毒毒力的不同，死亡率從0％到100％不等，任何地區或國家暴發疫情時，都對當地的生豬養殖業及相關行業造成破壞性影響，但是，目前還沒有證實ASF有感染人的風險。

非洲豬瘟與豬瘟的其他出血性疾病的癥狀和病變都很相似，其亞急性型和慢性型在生產現場實際上難以區別的，因而必須用實驗室診斷方法才能鑒別。包括以病原學為基礎的病毒分離-血細胞吸附試驗、直接免疫熒光法、普通PCR和熒光定量PCR及雙抗體夾心ELISA測定ASFV抗原，以及以血清學為基礎的間接ELISA測定ASF特異性抗體、免疫印跡和間接免疫熒光測抗體等方法。而常規PCR或實時熒光定量PCR核酸檢測技術，是目前用于檢測非洲豬瘟最有效的檢測方法，具有檢測靈敏度高、特異性好等優點。因而，對于樣品的前處理以及洲豬瘟病毒核酸的提取是至關重要的前提。

二、檢測標準

本實驗方案的引用標準主要有：非洲豬瘟診斷技術 GB/T 18648-2002。

在所有方法其中最受關注的是PCR法，PCR已成功應用于豬樣品（血液、器官、肉制品等）和蜱中ASFV基因組的檢測。ASFV為DNA病毒，核酸穩定性高，所有經過驗證的PCR技術均可以在活體豬臨床癥狀出現前實現檢測。PCR是可以代替病毒分離鑒定的一種靈敏、特異、快速的ASFV 檢測技術。同時，相比于抗原檢測技術，如酶聯免疫吸附試驗（ELISA），PCR具有更高的敏感性和特異性。PCR技術本身還分為成本較低的普通PCR電泳法和速度更快的實時熒光PCR法（qPCR）。

在《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》（2016年）中推薦使用的常規和實時熒光PCR得到了長期的充分驗證，是常規診斷的重要工具。引物和探針多以VP72編碼區域作為靶基因設計，同樣可檢測的編碼病毒結構蛋白基因還有p54、K205R等，基因越穩定、在宿主體內復制轉錄越早則越適合作為PCR靶基因。

在檢測過程中要嚴格遵守實驗室生物安全操作規范。樣品檢測前，要在生物安全柜中對樣品進行處理和滅活，每批樣品檢測結束后，要對檢測過程中產生的廢物、廢液等進行消毒和無害化處理，對相關儀器、工作臺面、環境進行嚴格消毒。檢測任務完成后，要對所有剩余樣品進行高溫高壓處理，做好樣品銷毀記錄，不得留樣。

三、主要檢測設備（便捷式實時熒光定量PCR儀）產品詳細資料網站：http://www.molarray.com/product_show.aspx?id=15